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CRISPR 產(chǎn)品和服務(wù)

CRISPR-Cas9 是一種用于基因組編輯的工具，已從細(xì)菌的先天免疫反應(yīng)中改編而來(lái)。細(xì)菌捕獲并存儲(chǔ)來(lái)自入侵病毒或 DNA 的 DNA 片段，該區(qū)域稱為 CRISPR（成簇規(guī)則間隔短回文重復(fù)序列）陣列。該區(qū)域不斷轉(zhuǎn)錄，產(chǎn)生短的 CRISPR RNA (crRNA) 引導(dǎo)序列，當(dāng)它們檢測(cè)到入侵病毒或與其互補(bǔ)的 DNA 時(shí)，結(jié)合并招募 Cas9（CRISPR 相關(guān)蛋白 9）核酸酶，然后特異性切割入侵的DNA。這導(dǎo)致入侵的DNA降解，從而保護(hù)細(xì)胞。

該 CRISPR-Cas9 系統(tǒng)也經(jīng)過(guò)修改，可用于哺乳動(dòng)物細(xì)胞。通過(guò)在哺乳動(dòng)物細(xì)胞中表達(dá) Cas9 核酸酶并引入對(duì)我們感興趣的基因特異的單一引導(dǎo) RNA 序列 (sgRNA)，我們可以將雙鏈斷裂引入細(xì)胞的基因組 DNA，以敲除或修改感興趣的基因。

CRISPR 基因敲除

Cas9（化膿性鏈球菌CRISPR 相關(guān)蛋白 9）是一種核酸內(nèi)切酶，當(dāng)被 sgRNA（單向?qū)?span> RNA）募集到特定 DNA 序列時(shí)，會(huì)在 DNA 中引入雙鏈斷裂。這種雙鏈斷裂最常在哺乳動(dòng)物細(xì)胞中通過(guò)非同源末端連接 (NHEJ) 進(jìn)行修復(fù)。

NHEJ 通常會(huì)導(dǎo)致切割位點(diǎn)的幾個(gè)堿基對(duì)的缺失或插入，當(dāng)導(dǎo)致移碼時(shí)，會(huì)導(dǎo)致目標(biāo)基因的功能失活或敲除。為了敲除您感興趣的基因，BPS Biosciences 提供以下解決方案：

整合 sgRNA 和 Cas9 敲除慢病毒

我們的 Cas9 慢病毒是無(wú)法復(fù)制的、基于 HIV 的 VSV-G 假型慢病毒顆粒，可隨時(shí)轉(zhuǎn)導(dǎo)到幾乎所有類型的哺乳動(dòng)物細(xì)胞中，包括原代和非分裂細(xì)胞。這些顆粒包含一個(gè)由 EF1a 啟動(dòng)子驅(qū)動(dòng)的 CRISPR/Cas9 基因，以及由 U6 啟動(dòng)子驅(qū)動(dòng)的 4 個(gè)經(jīng)驗(yàn)證的 sgRNA（單向?qū)?span> RNA），靶向您感興趣的基因。

我們的慢病毒到達(dá)時(shí)可直接轉(zhuǎn)導(dǎo)——不需要其他組件——我們整合 sgRNA 和 Cas9 慢病毒是快速生成敲除細(xì)胞系或細(xì)胞庫(kù)的可靠方法；基因敲除效率可高達(dá) 90%，具體取決于基因和細(xì)胞類型。

非整合 sgRNA 和 Cas9 敲除慢病毒

與我們的整合 sgRNA 和 Cas9 慢病毒不同，我們的非整合慢病毒由突變的整合酶制成，導(dǎo)致 sgRNA 和 Cas9 在您的目標(biāo)細(xì)胞中僅瞬時(shí)表達(dá)。盡管與我們的整合慢病毒相比，這可能會(huì)導(dǎo)致較低的敲除效果（取決于您的基因和細(xì)胞類型），但非整合慢病毒消除了慢病毒隨機(jī)整合到生理相關(guān)基因中的風(fēng)險(xiǎn)，并最大限度地減少了任何潛在的關(guān)閉如果 Cas9 穩(wěn)定表達(dá)，可能會(huì)發(fā)生靶向。我們所有的慢病毒都經(jīng)過(guò)驗(yàn)證并可以直接轉(zhuǎn)導(dǎo)。

Cas9 表達(dá)細(xì)胞池

這些細(xì)胞庫(kù)已經(jīng)組成型表達(dá) Cas9。要敲除您感興趣的基因，您只需通過(guò)電穿孔或慢病毒轉(zhuǎn)導(dǎo)傳遞您的基因特異性 sgRNA。這些價(jià)格實(shí)惠，可以成為設(shè)置您自己的敲除實(shí)驗(yàn)或篩選的經(jīng)濟(jì)高效的平臺(tái)。

Cas9蛋白

我們的 Cas9 蛋白可用于體外切割分析，以比較和鑒定具有最高切割效率的 sgRNA。

定制淘汰賽服務(wù)

借助 BPS Bioscience 的定制細(xì)胞系開發(fā)服務(wù)，我們經(jīng)驗(yàn)豐富的科學(xué)家團(tuán)隊(duì)可以使用 CRISPR-Cas9 許可技術(shù)在 70 多種不同細(xì)胞類型中生成定制的敲除細(xì)胞系，針對(duì)您感興趣的任何基因. 開發(fā)過(guò)程由單獨(dú)的里程碑組成，其中在每個(gè)里程碑完成后提供數(shù)據(jù)。通過(guò)直接與您合作，每個(gè)項(xiàng)目都是針對(duì)所需的可交付成果進(jìn)行定制的。聯(lián)系我們以詳細(xì)了解我們可以提供的服務(wù)。

CRISPR 敲入

當(dāng) Cas9 在細(xì)胞的基因組 DNA 中產(chǎn)生雙鏈斷裂時(shí)，哺乳動(dòng)物細(xì)胞會(huì)通過(guò)非同源末端連接 (NHEJ) 或同源定向修復(fù) (HDR) 進(jìn)行修復(fù)。當(dāng)細(xì)胞經(jīng)歷 HDR 時(shí)，我們可以提供替代模板，ssDNA 寡核苷酸或質(zhì)粒供體，其中包含我們想要引入的基因突變（突變或標(biāo)簽），兩側(cè)是同源臂，細(xì)胞將使用它作為模板將這些變化復(fù)制并整合到基因組 DNA 中。

定制敲入服務(wù)

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CRISPR激活

CRISPR 協(xié)同激活介質(zhì) (SAM) 系統(tǒng)用于誘導(dǎo)任何感興趣基因的轉(zhuǎn)錄激活和表達(dá)。SAM 系統(tǒng)由 3 個(gè)組件組成：(1) 突變的 dCas9（化膿性鏈球菌CRISPR 相關(guān)蛋白 9），缺乏任何核酸內(nèi)切酶活性，與轉(zhuǎn)錄激活因子 VP64 融合；(2) P65（轉(zhuǎn)錄因子p65，或核因子NF-κ-B p65）和HSF1（熱激因子1）與MS2標(biāo)簽融合；(3) 帶有 MS2 標(biāo)簽的 sgRNA，靶向目標(biāo)基因的啟動(dòng)子區(qū)域。

一旦 sgRNA-MS2 靶向感興趣基因的啟動(dòng)子區(qū)域，dCas9-VP64 和 MS2-P65-HSF1 就會(huì)被募集到基因組 DNA 中的位點(diǎn)并開始轉(zhuǎn)錄，從而誘導(dǎo)所需基因的表達(dá)。誘導(dǎo)可以超過(guò)一百倍，這取決于基因。

為了利用 SAM 系統(tǒng)誘導(dǎo)您感興趣的基因表達(dá)，BPS Biosciences 提供以下解決方案：

CRISPR 激活 (CRISPRa) 細(xì)胞系

除 sgRNA-MS2 外，這些細(xì)胞系穩(wěn)定表達(dá)激活您感興趣的基因所需的所有成分。這些細(xì)胞表達(dá)突變的 dCas9（缺乏任何核酸內(nèi)切酶活性）與 VP64、轉(zhuǎn)錄激活因子、P65（轉(zhuǎn)錄因子 p65，或核因子 NF-κ-B p65）和 HSF1（熱休克因子 1）與 MS2 標(biāo)簽融合.

當(dāng)這些細(xì)胞用 MS2 標(biāo)記的 sgRNA 轉(zhuǎn)導(dǎo)到您感興趣的基因的啟動(dòng)子區(qū)域時(shí)，dCas9-VP64 和 MS2-P65-HSF1 被募集到基因組 DNA 中的位點(diǎn)并開始轉(zhuǎn)錄，誘導(dǎo)您所需基因的表達(dá). 基因特異性 sgRNA-MS2 可以通過(guò)慢病毒轉(zhuǎn)導(dǎo)或電穿孔傳遞。這些細(xì)胞系可以成為一個(gè)方便且經(jīng)濟(jì)高效的平臺(tái)，用于設(shè)置您自己的激活實(shí)驗(yàn)或篩選，而無(wú)需首先選擇表達(dá) dCas9-VP64 和 MS2-P65-HSF1 的單細(xì)胞克隆，從而節(jié)省寶貴的時(shí)間。

整合 dCas9-VP64 和 MS2-P65-HSF1 慢病毒

我們的 Cas9 慢病毒是無(wú)法復(fù)制的、基于 HIV 的 VSV-G 假型慢病毒顆粒，可隨時(shí)轉(zhuǎn)導(dǎo)到幾乎所有類型的哺乳動(dòng)物細(xì)胞中，包括原代細(xì)胞和非分裂細(xì)胞。這些顆粒包含 dCas9-VP64（具有殺稻瘟素抗性）和 MS2-P65-HSF1（具有潮霉素抗性）基因，可與 sgRNA-MS2 激活慢病毒結(jié)合使用，以生成您自己的 CRISPR 激活 (CRISPRa) 細(xì)胞系.

整合 sgRNA-MS2 激活慢病毒

這些慢病毒顆粒包含 4 個(gè)經(jīng)過(guò)驗(yàn)證的 sgRNA（單向?qū)?span> RNA），靶向目標(biāo)基因的啟動(dòng)子區(qū)域，與 MS2 融合并由 U6 啟動(dòng)子驅(qū)動(dòng)。這些慢病毒到達(dá)時(shí)可直接轉(zhuǎn)導(dǎo)到您的 dCas9-VP64 和 P65-HSF1-MS2 表達(dá)細(xì)胞系中，以穩(wěn)定激活您感興趣的基因的表達(dá)。

sgRNA-MS2 激活質(zhì)粒

雖然 Integrating sgRNA-MS2 慢病毒可用于生成穩(wěn)定誘導(dǎo)感興趣基因表達(dá)的細(xì)胞庫(kù)或細(xì)胞系，但 sgRNA-MS2 質(zhì)粒可以轉(zhuǎn)染或電穿孔到您的細(xì)胞中以進(jìn)行瞬時(shí)或穩(wěn)定（在藥物選擇后）激活。這還為您提供了無(wú)病毒選項(xiàng)，具體取決于您的實(shí)驗(yàn)室環(huán)境或偏好。

自定義 CRISPR 激活 (CRISPRa) 服務(wù)

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CRISPR 屏幕

CRISPR 激酶敲除文庫(kù)、陣列或池（即將推出！）

BPS Bioscience 正在構(gòu)建一個(gè)針對(duì)人類激酶的 CRISPR 敲除文庫(kù)，可提供陣列和混合格式。我們的整合慢病毒可直接轉(zhuǎn)導(dǎo)到幾乎所有類型的哺乳動(dòng)物細(xì)胞中，包括原代細(xì)胞和非分裂細(xì)胞。除了適當(dāng)?shù)目刂仆猓糠N格式還包括每個(gè)基因 4 個(gè) sgRNA。我們的陣列形式隨時(shí)可用，以每孔一個(gè)基因的形式提供，無(wú)需任何高通量篩選平臺(tái)或生物信息學(xué)分析。我們的混合形式以高滴度提供，并提供更便宜的替代方案，具體取決于您的篩選能力。

定制服務(wù)

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