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Favorgen特約代理
產品時間:2021-07-07
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FavorPrep™ Tri-RNA 試劑

 

FavorPrep™ Tri-RNAReagent 是一種來自改進的苯酚和異硫氰酸胍 (GSN) 方法的試劑,用于單步 RNA 分離。在樣品勻漿或裂解過程中,Tri-RNA 試劑保持 RNA 的完整性,同時破壞細胞和溶解細胞成分。 Tri-RNA 試劑的組成包括苯酚和 GSN 的單相溶液。生物樣品在 Tri-RNA 試劑中勻漿或裂解,勻漿通過添加氯仿、渦旋和離心分離成水相和有機相。 RNA 僅保留在水相中(透明的上相),DNA 保留在中間相中,蛋白質保留在有機相中(紅色)。通過加入異丙醇從水相中沉淀 RNA 并溶解/濃縮。如果需要,可以分別用乙醇和異丙醇從中間相和有機相中依次沉淀 DNA 和蛋白質,然后溶解/濃縮。

 

特征

 

★ 一步法從組織、細胞、細菌、植物、酵母和生物體液中分離總RNA

 

★ 整個RNA分離過程不到1小時。

 

★ 純化后的RNA可應用于:RT-PCRNorthern雜交、RNase保護、Poly-A+RNA篩選、差異展示和微陣列分析。應用

 

100 次使用 儲存: 4℃ 棕色玻璃瓶中,供日常使用

 

程序:

 

1. 1 ml Tri-RNA Reagent 加入 100 mg 組織(或從最多 10 ml 血液或 106 個培養細胞中沉淀的血液 RNA 病毒,或 10 cm2 培養板)

2. Tri-RNA Reagent 中使用玻璃 Teflon Polytron 勻漿器勻漿組織樣品(培養細胞可以通過重復移液裂解;濃縮的血液 RNA 病毒可以通過劇烈渦旋裂解)。

3. 將勻漿在室溫下放置 5 分鐘。

4. 加入 0.2 ml 氯仿(未提供)并劇烈混合。

5. 12,000 rpm 離心 3 分鐘以分離各相,RNA 在透明的上層水相中。

6. RNA 相轉移到干凈的管中。

7. 加入 1x 體積的異丙醇,渦旋以沉淀 RNA,在室溫下放置 10 分鐘,然后以 12,000 rpm 離心 15 分鐘。

8. 去除上清液。

9. 0.5 ml 冰冷的 70% 乙醇清洗 RNA 沉淀,12,000 rpm 離心 1 分鐘,小心除去上清液。

10. 短暫旋轉以確保 RNA 沉淀沉淀到管的側壁,然后小心地去除任何殘留的上清液,不要接觸 RNA 沉淀。

11. RNA 重懸在少量 TEpH8.0

 

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