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雙鏈特異性核酸酶
目錄號EA001; EA002; EA003; EA008
-選擇性切割DNA-RNA雜交雙鏈體中的ds DNA和DNA-
區(qū)分*匹配和
非匹配的短雙鏈體-對ss DNA和RNA無活性
-熱穩(wěn)定
-被EDTA抑制
雙鏈特異性核酸酶(DSN)是一種從紅金(Kamchatka)蟹的肝胰腺中純化的酶(Shagin 等,2002)。DSN對在DNA-RNA雜交雙鏈體中裂解雙鏈(ds)DNA和DNA表現(xiàn)出強烈的偏愛,并且實際上對單鏈(ss)DNA或單鏈或雙鏈RNA無活性。此外,該酶能夠區(qū)分*匹配和不*匹配的短DNA雙鏈體。DSN被廣泛用于全長富集的cDNA標準化(Zhulidov 等,2004; Bogdanova 等,2011a)和用于下一代測序的標準化RNA-seq文庫的構(gòu)建((Christodoulou 等。(2011年),Illumina DSN標準化協(xié)議)。已批準的DSN應(yīng)用列表還包括基因組DNA的標準化(Shagina 等,2010),cDNA耗竭和核糖體cDNA耗竭(Bogdanova 等,2009; Bogdanova 等,2011b; Yi 等,2011),減去cDNA(Peng 等,2008),SNP檢測(Shagin 等,2002; Liu 等,2011),構(gòu)建無重復(fù)的FISH探針(Swennenhuis 等,2012),多重?zé)晒鈾z測miRNA (Yin 等人,2012),定量端粒突出端測定(Zhao 等人,2008; Zhao 等人,2008)。(2011年)等。
產(chǎn)品 貓。# 描述 尺寸 價錢 使用手冊(PDF)
雙鏈特異性核酸酶,凍干 來自Red King(Kamchatka)蟹肝胰腺的熱穩(wěn)定核酸酶,強烈希望裂解雙鏈DNA和DNA-RNA雜交雙鏈體中的DNA 10U DSN用戶手冊
EA003 10U evrogen
EA001 50U evrogen
EA002 100 U evrogen
EA008 1000U evrogen
使用Shagin 等人的改良方案從Red King(Kamchatka)蟹肝胰腺中純化DSN 。,2002。使用改良的Kunitz測定法(Kunitz,1950)測量DNAase活性,其中單位定義定義為:添加到50μg/ ml小牛胸腺DNA中的DSN量,導(dǎo)致每分鐘0.001吸收單位增加?;钚詼y定是在25°C,含有5mM MgCl 2的 50 mM Tris-HCl緩沖液(pH 7.15)中進行的。
運輸和儲存條件:
套件的所有組件均可在環(huán)境溫度下運輸。到達后,所有組件都必須在-20°C下存儲。
研究產(chǎn)品:
-光誘導(dǎo)的高對比度光轉(zhuǎn)換
-可通過流式細胞儀或熒光顯微鏡輕松檢測
-無需輔因子,底物或化學(xué)染色
-適用于長期追蹤細胞事件
可光活化的熒光蛋白(PAFP)代表了監(jiān)視細胞事件的*工具。PAFP響應(yīng)于特定光的照射而改變光譜特性。近年來,PAFP已用于時空方式光學(xué)標記和跟蹤活細胞,細胞器和細胞內(nèi)分子的新方法的開發(fā)。PAFP成為超分辨率成像技術(shù)*的工具。此外,PAFPs為研究細胞生理學(xué)開辟了新的可能性,特別是,它們允許仔細確定蛋白質(zhì)的半衰期。
應(yīng)用領(lǐng)域
跟蹤細胞,細胞器和蛋白質(zhì)的
運動PAFPs比光漂白技術(shù)(例如光漂白后的熒光恢復(fù)(FRAP)或光漂白中的熒光損失(FLIP))使細胞和蛋白質(zhì)的研究運動更,直接,且破壞更少。PAFP標記的單個細胞,細胞器或蛋白質(zhì)部分可以使用聚焦光束進行光轉(zhuǎn)換。然后,可以直接看到活體組織內(nèi)的激活對象[Patterson and Lippincott-Schwartz,2002; Chudakov 等。,2004;Chapman 等。,2005;Gurskaya 等。,2006;Chudakov 等。,2007]。近年來,PAFP成為超分辨率成像技術(shù)*的工具[Subach 等。,2010]。
蛋白質(zhì)降解研究
PAFP允許仔細確定蛋白質(zhì)半衰期[Zhang 等。,2007]。用編碼與PAFP融合的靶蛋白的構(gòu)建體轉(zhuǎn)染細胞。融合蛋白和相應(yīng)熒光信號的穩(wěn)態(tài)濃度取決于蛋白合成和成熟速率以及蛋白降解速率。PAFP在整個細胞中進行光轉(zhuǎn)化后,會出現(xiàn)一組*的熒光分子,這與新的PAFP分子的合成和成熟無關(guān)。因此,活化熒光的衰減直接對應(yīng)于PAFP標記的蛋白質(zhì)的降解。激活信號的延時成像可以實時量化單個細胞水平的降解過程。
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